致敏試驗(yàn)
致敏試驗(yàn)
具有致敏作用的化學(xué)物經(jīng)一定途徑進(jìn)入機(jī)體，與組織蛋白結(jié)合形成完全抗原，刺激免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞或體液抗體；經(jīng)1~2周致敏期，使體內(nèi)免疫反應(yīng)得到充分發(fā)展，形成一定數(shù)量的致敏淋巴細(xì)胞或特異抗體。當(dāng)再次接觸（激發(fā)）時(shí)使機(jī)體對(duì)該化學(xué)物產(chǎn)生感受性增高的狀態(tài)，以一定的異常形式表現(xiàn)
致敏試驗(yàn)與刺激試驗(yàn)的區(qū)別
刺激試驗(yàn)是一個(gè)局部的炎癥反應(yīng)，而致敏是全身免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，屬于細(xì)胞免疫應(yīng)答
應(yīng)用范圍舉例：
常用測試方法
Common test methods
豚鼠最大劑量法（GPMT） | |
封閉式貼敷法（Buehler 試驗(yàn)） |
局部淋巴結(jié)試驗(yàn)法（LLNA） |
其中豚鼠最大劑量法（GPMT）和封閉式貼敷法（Buehler試驗(yàn)）是最常用的、生物安全性評(píng)價(jià)中使用率最高的兩種方法。
豚鼠最大劑量試驗(yàn)是最敏感的方法，歐洲國家使用此方法較廣泛；
封閉式貼敷試驗(yàn)適用于局部產(chǎn)品，美國常用此方法。
局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA）被經(jīng)濟(jì)與合作發(fā)展組織接受作為當(dāng)前豚鼠試驗(yàn)的唯一替代方法，該法對(duì)動(dòng)物保護(hù)方面也有所改善，也被認(rèn)可用于化學(xué)物致敏活性的檢測。
測試標(biāo)準(zhǔn)
testing standard
常見測試標(biāo)準(zhǔn)：
醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第10部分：刺激與遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn) ISO 10993-10:2010 | |
醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第10部分:刺激與皮膚致敏試驗(yàn) GB/T 16886.10-2017 |
測試步驟
Test Step
致敏試驗(yàn)-豚鼠最大劑量法（GPMT）
試驗(yàn)原理：單一化學(xué)物采用豚鼠最大劑量試驗(yàn)，對(duì)材料在試驗(yàn)條件下使豚鼠產(chǎn)生皮膚致敏反應(yīng)的潛能做出評(píng)定。
1
準(zhǔn)備動(dòng)物
2
預(yù)試驗(yàn)
預(yù)試驗(yàn)?zāi)康模簽榱舜_定主試驗(yàn)中所用試驗(yàn)樣品的濃度。
確定主試驗(yàn)中所用實(shí)驗(yàn)樣品的濃度
為主試驗(yàn)的局部誘導(dǎo)階段所選擇的最高濃度應(yīng)僅導(dǎo)致輕度紅斑，不產(chǎn)生其他有害作用
為主試驗(yàn)的激發(fā)階段選擇的最高濃度應(yīng)不使動(dòng)物產(chǎn)生紅斑
3
主試驗(yàn)
3.1 動(dòng)物分組
每種試驗(yàn)樣品應(yīng)至少使用10只動(dòng)物，對(duì)照組至少使用5只動(dòng)物。
10只試驗(yàn)動(dòng)物和5只對(duì)照動(dòng)物如全部呈陰性反應(yīng)，則再進(jìn)行試驗(yàn)也未必會(huì)出現(xiàn)陽性反應(yīng)。
但是，如出現(xiàn)任何疑似反應(yīng)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行再激發(fā)，如仍有疑似反應(yīng)，則要重新進(jìn)行試驗(yàn)，最少采用20只試驗(yàn)動(dòng)物和10只對(duì)照動(dòng)物。
3.2 皮內(nèi)誘導(dǎo)階段->局部誘導(dǎo)階段->激發(fā)階段
按下圖所示（A、B和C），在每只動(dòng)物去毛的肩胛骨內(nèi)側(cè)部位成對(duì)皮內(nèi)注射0.1mL
結(jié)果評(píng)價(jià)
Evaluation of the results
結(jié)果評(píng)價(jià)
對(duì)照組動(dòng)物評(píng)分小于1，試驗(yàn)組評(píng)分≥1時(shí)，提示為致敏
對(duì)照組動(dòng)物評(píng)分≥1，實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)超過對(duì)照組中最嚴(yán)重的反應(yīng)，認(rèn)為致敏
如試驗(yàn)組動(dòng)物出現(xiàn)反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)多于對(duì)照組動(dòng)物，但反應(yīng)強(qiáng)度并不超過對(duì)照組，可能需要在首次激發(fā)后1周~2周進(jìn)行再次激發(fā)，以明確反應(yīng)