1、試驗(yàn)?zāi)康?/strong>

本方法系將植入物插入試驗(yàn)動物的骨組織內(nèi)，對試驗(yàn)樣品植入物與對照樣品植入物的生物學(xué)反應(yīng)進(jìn)行比較，評估骨組織對植入材料的生物學(xué)反應(yīng)。植入部位宜根據(jù)材料的最終用途選擇松質(zhì)骨“海綿狀”或皮質(zhì)骨。

2、試驗(yàn)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)

GB/T 16886.6 -2022 醫(yī)療器械生物學(xué)評價 第6部分：植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)；

ISO 10993-6:2016 Biological evaluation of medical devices—Part 6: Tests for local effects after implantation。

3、樣品制備

固形樣品可加工成螺釘狀或刻有螺紋，以使植入物在骨內(nèi)能保持最初的穩(wěn)定性。如無法加工成螺釘狀，可制成圓柱形。根據(jù)材料屬性和試驗(yàn)?zāi)康目刹捎闷渌麡悠沸螤睿ㄈ绨魻?、糊劑）?/span>

植入物尺寸根據(jù)選用的試驗(yàn)動物和骨的大小來確定，骨干中部皮質(zhì)骨內(nèi)植入物應(yīng)考慮下列典型的尺寸：

a）兔：直徑2mm, 長6mm的圓柱狀植入物；

b）犬、綿羊和山羊：直徑4mm、長12mm的圓柱狀植入物；

c）兔、犬、綿羊、山羊和豬：2mm~4.5mm 骨內(nèi)螺釘式植入物。

4、對照樣品的選擇

對照樣品可以為上市對照，也可以依據(jù)GB/T 16886.12 附錄A 選擇陰性對照材料，如PE, 硅樹脂、氧化鋁、不銹鋼。

5、實(shí)驗(yàn)動物

植入物應(yīng)植入嚙齒動物、犬、綿羊、山羊、豬或兔的骨內(nèi)，按照ISO 10993-2規(guī)定的原則選擇其中的一種動物。種屬間骨的生理學(xué)差異至關(guān)重要，宜在植入前先對其進(jìn)行評估。另外，相同種屬的非特定目的選育的動物之間骨質(zhì)量可能會有變異，并且可能需要測定骨密度，以識別合適的試驗(yàn)動物和解釋試驗(yàn)結(jié)果。

6、植入部位

試驗(yàn)和對照樣品應(yīng)采用等效的解剖位點(diǎn)，試驗(yàn)植入物應(yīng)植于對照植入物的對側(cè)。選擇植入部位應(yīng)使植入物移位的風(fēng)險為最低。每一植入期應(yīng)評價至少10個試驗(yàn)樣品和10個對照樣品。用于評價一種材料的組織樣本應(yīng)至少取自3只動物。

植入部位的數(shù)目應(yīng)按下列：兔每只最多應(yīng)有6個植入部位，包括3個試驗(yàn)樣品和3個對照樣品。犬、綿羊、山羊或豬每只最多應(yīng)有12個植入部位，包括6個試驗(yàn)樣品和6個對照樣品。任何一直動物不應(yīng)植入多于12個樣品。

選擇動物大小、動物體重和年齡以及植入部位時，宜確保植入物放置不會造成試驗(yàn)部位病理性骨折的重大風(fēng)險。使用年幼動物時，確保植入物避開骺區(qū)或其他未發(fā)育成熟骨尤為重要。

7、植入步驟

進(jìn)行骨制備時，采用低轉(zhuǎn)速并間歇地在骨上鉆孔，操作時用生理鹽水和吸引器進(jìn)行充分灌洗，因?yàn)檫^熱可導(dǎo)致局部組織壞死。

植入物直徑與骨植入床適配良好對于避免纖維組織向骨內(nèi)生長至關(guān)重要。

暴露每個股骨或脛骨的皮質(zhì)，鉆出適量的孔用于植入樣品、兔最多制備3個孔，較大動物最多制備6個孔，植入前將孔擴(kuò)至最終直徑或攻出螺紋。柱狀樣品用手指按壓嵌入，螺釘狀植入物用器械按預(yù)定轉(zhuǎn)矩旋緊到位并記錄該轉(zhuǎn)矩。

8、植入周期

應(yīng)根據(jù)臨床可能接觸時間，或是持續(xù)至相應(yīng)生物學(xué)反應(yīng)達(dá)到或超過某一穩(wěn)定狀態(tài)的時間，來確定試驗(yàn)周期，所選擇的時間點(diǎn)應(yīng)進(jìn)行說明和論證。確保生物學(xué)組織反應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。表1為標(biāo)準(zhǔn)推薦的長期植入觀察期選擇。

表1. 皮下組織、肌肉、骨長期植入試驗(yàn)觀察期選擇

9、取樣

到試驗(yàn)終點(diǎn)時，安樂處死動物后，解剖取樣。制作病理切片，HE染色。

10、生物學(xué)反應(yīng)評價

通過記錄不同時間點(diǎn)觀察到的肉眼和組織病理學(xué)反應(yīng)來評價生物學(xué)反應(yīng)。將試驗(yàn)樣品、對照樣品或假手術(shù)部位的反應(yīng)進(jìn)行比較。依據(jù)GB/T 16886.6 附錄E進(jìn)行植入后局部生物學(xué)反應(yīng)評分。與上市對照或者音信對照比較，依據(jù)下表判定器械的組織反應(yīng)。

表6. 組織病理學(xué)結(jié)果判定